微生物可以低溫保存，低溫保存法有廣泛的微生物保存法。對于需要雜亂養(yǎng)分的微生物種，如果不能堅(jiān)持其生命力(如植物病原性真菌)的其他儲(chǔ)存方法，一般可以低溫保存。

　　這種方法是以較慢的冷凍速度(1℃/分鐘)冷凍存在于小管或安瓿中的細(xì)胞，直到-150℃，然后將這些小管保存在-150℃。～-在196℃的液氮中。低溫冷凍保護(hù)劑不同于冷凍干燥法中使用的冷凍劑。甘油(10%)是ATCC常見的一種、大多數(shù)細(xì)胞株由二甲亞(5%)和培養(yǎng)液制成的混合物保存。

　　這些化學(xué)物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞可以防止內(nèi)膜的冷凍損傷。在低溫容器中保存細(xì)胞恢復(fù)時(shí)，需要小心操作。當(dāng)管道被加熱時(shí)，形成的霜會(huì)殺死細(xì)胞，正確操作可以防止這種麻煩。只有快速凍結(jié)樣品，才能減少活力的喪失。方法是將密封的管道迅速放入37℃的水中，直到所有的冰都溶解，然后打開管口，將內(nèi)容物移入培養(yǎng)液。低溫保存的微生物需要保存在非常低溫的環(huán)境中，所以需要液氮罐。在長期儲(chǔ)存過程中，需要經(jīng)常注意液氮的填充。

　　與凍干法相比，這種儲(chǔ)存方法需要更多的資金，包括勞動(dòng)力和液氮等，以保持儲(chǔ)存溫度。金鳳液氮罐

　　1數(shù)據(jù)病毒低溫保管所需數(shù)據(jù)包括：熱收縮塑料管、液氮罐、防護(hù)手套及面罩、標(biāo)記筆、氣體噴燈、液氮保溫瓶。

　　2方法

　　(1)剪一段兩端各超過冷凍管長度2cm的熱縮塑料管。金鳳液氮罐

　　(2)將含有清除病毒懸液(安排培養(yǎng)的上清培養(yǎng)液，或安排培養(yǎng)液中的細(xì)胞溶解物)的上清懸液冷卻幾分鐘，用殺菌移液管將0.2ml冷卻后的上清懸液分配到冷凍管中，并擰緊蓋子。

　　將病毒冷凍管放入熱收縮塑料管中，刺入正確的標(biāo)簽。

　　(4)用噴燈小心加熱收縮塑料管，并將其包裹在冷凍管中。切記不要在過高的溫度下加熱收縮塑料管。

　　再次小心加熱收縮塑料管的兩端，用大鑷子將管端口夾緊至完全密封。

　　(6)在配有液氮的保溫瓶中快速冷凍密封的冷凍管(操作時(shí)需戴口罩和手套)。

　　(7)將冷凍冷凍管放入液氮罐內(nèi)的格子中，一起記錄樣品的具體存放方向、實(shí)驗(yàn)編號(hào)、存放日期等。

　　(8)需求耗時(shí)，從液氮罐中快速取出所需樣品，放入37℃水浴箱冷凍后，用解剖刀將熱收縮塑料管用冷凍管的硅化墊圈切開。擰開冷凍管的蓋子時(shí)，不需要去除熱收縮塑料管。